Kromasil 色譜柱的使用與維護(hù)
色譜柱安裝與平衡
使用經(jīng)過濾并脫氣的流動(dòng)相( 不含任何緩沖液) *沖洗HPLC 泵和管線，確保系統(tǒng)中沒有氣泡。按照流向標(biāo)簽( 位于色譜柱上) 指示的方向?qū)⑸V柱一端連接至進(jìn)樣器，另一端不接檢測(cè)器。將泵流速設(shè)置為0.1 mL/min( 或系統(tǒng)允許zui低設(shè)置) 并在5 分鐘內(nèi)增大至正常流速。
當(dāng)色譜柱出口處有溶劑自由流出時(shí)停止泵送，擦拭出口端并將其連接到檢測(cè)器。
以正常流速和約10-30 倍色譜柱體積的流動(dòng)相來平衡色譜柱。
檢測(cè)柱效
強(qiáng)烈建議用戶在收到Kromasil 原裝jin口色譜柱15 天內(nèi)進(jìn)行柱效檢測(cè)，并在整個(gè)使用周期內(nèi)，
進(jìn)行定期的柱效測(cè)試，以便隨時(shí)監(jiān)測(cè)色譜柱的壽命情況。
運(yùn)行參數(shù)
5 μm 及3.5 μm 色譜柱最大耐受壓力400 Bar，2.5 μm 及1.8 μm 色譜柱最大耐受壓力1000 bar。最高工作溫度不高于60 ℃。在使用Kromasil Classic 系列C18，C8，C4，Phenyl
色譜柱時(shí)，流動(dòng)相pH 控制在1.5-9.5 之間，這樣有利于延長色譜柱的使用壽命。
流動(dòng)相的配置
僅使用HPLC 色譜純?nèi)軇?、水、最高純度的化學(xué)品和試劑。
使用前對(duì)所有流動(dòng)相進(jìn)行過濾和脫氣。
確保溶劑可互溶。
色譜柱的保存
色譜柱使用完畢后，應(yīng)盡可能地沖洗掉殘留在色譜柱內(nèi)的雜質(zhì)和沉積物。保存在適合的儲(chǔ)存溶劑中，儲(chǔ)存溶劑可以參考COA 中建議使用溶劑。儲(chǔ)存環(huán)境需保持溫度穩(wěn)定、避光，并注意檢查Peek堵頭，防止松動(dòng)導(dǎo)致柱內(nèi)溶劑流失。
色譜柱的清洗
柱壓升高，保留時(shí)間變化和柱效降低都是色譜柱被污染的表現(xiàn)。
多數(shù)情況下，通過正確的沖洗能夠解決上述問題。我們需要謹(jǐn)記的是越早沖洗或再生越會(huì)更容易的解決上述問題。
通常具有較強(qiáng)吸附的雜質(zhì)都集中在色譜柱進(jìn)口一端，zui簡單的方法是對(duì)色譜柱進(jìn)行反沖。反沖的方法只對(duì)填裝緊密的色譜柱有效，柱性能也不會(huì)發(fā)生變化。
反沖時(shí)，請(qǐng)按照下述的一般步驟，使用特定溶劑對(duì)色譜柱進(jìn)行清洗，并根據(jù)不同廠商的建議進(jìn)行，以免損壞色譜柱。
| 反相柱(C18, C18(w), C8,C4,C1, Phenyl, PhenylHexyl) | 未鍵合的硅膠柱(SIL) |
| 使用10 倍柱體積的如下溶劑依次清洗 a. 水: 乙腈=95:5 b. 四氫呋喃 c. 乙腈: 水=95:5 d. 不含鹽的流動(dòng)相 e. 流動(dòng)相 | 使用10 倍柱體積的如下溶劑依次清洗 a. 異丙醇 b. 甲醇 c. 乙酸乙酯 d. 流動(dòng)相 |
| 鍵合正相柱(CN, Diol) | 用于蛋白/ 多肽分析的反相柱(C18, C18(w), C8,C4,C1, Phenyl, PhenylHexyl) |
| 使用10 倍柱體積的如下溶劑依次清洗 a. 三氯jia烷 b. 異丙醇 c. 二氯甲烷 d. 流動(dòng)相 | a. 使用20 倍柱體積的不含鹽流動(dòng)相進(jìn)行清洗 b. 梯度清洗 流動(dòng)相A: 0.1%TFA 水溶液 : 乙腈=95 : 5流動(dòng)相B: 0.1%TFA 乙腈: 異丙醇=1 : 2 在30 min 內(nèi)，B 相從25% 升至100% 進(jìn)行清洗，運(yùn)行2 個(gè)梯度程序。 c. 流動(dòng)相平衡，切勿將色譜柱保存在TFA 中 |
反沖時(shí)，請(qǐng)將流動(dòng)相流速將至正常流速的1/10-1/5, 并斷開檢測(cè)器。反沖時(shí)，請(qǐng)將流動(dòng)相流速將至正常流速的1/10-1/5, 并斷開檢測(cè)器。
Kromasil 保護(hù)柱
色譜柱一旦污染，沖洗過程將非常耗時(shí)，建議使用保護(hù)柱減少對(duì)色譜柱的污染，
Kromasil 保護(hù)柱 :
• 與Kromasil 色譜柱具有相同的填料，*佳保護(hù)色譜柱，同時(shí)不影響分析結(jié)果。
• 柱芯柱套式設(shè)計(jì)，成本低。
部分常規(guī)保護(hù)柱訂貨信息
| 貨號(hào) | 描述 |
| 00000HHO | 2.1-4.6 mm guard holder |
| 00000KCO | 2.1-21.2 mm guard coupler |
| M05CLNGC | Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack) |
| M05CLNSK | Kromasil 100-5 -C18 3.0-4.6 mmguard starter kit |
| M05CMNGC | Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack) |
| M05CMNSK | Kromasil 100-5 -C8 3.0-4.6 mmguard starter kit |
| M05CSNGC | Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack) |
| M05CSNSK | Kromasil 100-5 -C4 3.0-4.6 mmguard starter kit |
| M05NHNGC | Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack) |
| M05NHNSK | Kromasil 100-5 -NH2 3.0-4.6 mmguard starter kit |
| M05PHNGC | Kromasil 100 -5 -Phenyl 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack) |
| M05PHNSK | Kromasil 100-5 -Phenyl 3.0-4.6mm guard starter kit |
| S05CNNGC | Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack) |
| S05CNNSK | Kromasil 60-5 -CN 3.0-4.6 mmguard starter kit |
| M05SINGC | Kromasil 100-5 -SIL 3.0-4.6 mmguard cartridges (5 pack) |
| M05SINSK | Kromasil 100 -5 -SIL 3.0-4.6 mm guard starter kit |
| S05DINGC | Kromasil 60-5 - Diol 3.0-4.6 mm guard cartridges (5 pack) |
| S05DINSK | Kromasil 60 -5 -Diol 3.0-4.6 mm guard starter kit |
